【產(chǎn)品名稱】
通用名稱:丙型肝炎病毒核心抗原檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫法）
【包裝規(guī)格】
96人份/盒
【預(yù)期用途】
本產(chǎn)品用于體外定性檢測人血清和血漿中的丙型肝炎病毒游離核心抗原。
利用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫法原理（ELISA）定性檢測人血清或血漿樣品中的丙型肝炎病毒游離核心抗原，做輔助檢測用。
丙型肝炎病毒（Hepatitis C Virus，HCV）是引起輸血后病毒性非甲非乙型肝炎的主要病原，主要通過輸血、靜脈吸毒傳播，也可通過密切接觸和母嬰傳播。目前全世界約有1.3至1.7億人為慢性丙肝病毒感染，每年有35萬多人死于與丙型肝炎相關(guān)的肝臟疾病，據(jù)估計(jì)，每年有三、四百萬人感染丙肝病毒。
丙肝病毒感染有時(shí)會導(dǎo)致急性癥狀疾病。從嚴(yán)重程度看，感染丙肝病毒有可能只出現(xiàn)幾周輕微癥狀，也可能終身患有嚴(yán)重慢性肝病，并可能導(dǎo)致肝硬化和肝癌。最初被感染后，大約80%的人并不會出現(xiàn)任何癥狀。可能出現(xiàn)的急性癥狀包括發(fā)熱、全身乏力、食欲下降、惡心、嘔吐、腹痛、尿色深、大便顏色變淺、關(guān)節(jié)酸痛和黃疸（皮膚和眼白發(fā)黃）。慢性感染者出現(xiàn)癥狀，可能表明其患有晚期肝病。一般地，15~20%左右的HCV感染者為自限性感染，超過80~85%的感染者發(fā)展為慢性丙型肝炎，其中又有20%的可發(fā)展為肝纖維化，最終有4~5%的肝纖維化患者發(fā)生肝細(xì)胞性肝癌，危害十分嚴(yán)重。丙型肝炎是由丙肝病毒引起的肝病。
丙型肝炎核心抗原檢測是新近發(fā)展的一種HCV感染的檢測方法。由于感染HCV后，HCV核心抗原出現(xiàn)較早，且與血清中HCV RNA載量呈正相關(guān)，并在HCV感染治愈或康復(fù)后消失，因此，可作為HCV感染的早期診斷、獻(xiàn)血員篩查、慢性HCV感染診斷、高危人群監(jiān)測、免疫功能障礙患者的HCV感染診斷、鑒別既往感染抑或現(xiàn)癥感染，并可用于抗病毒療效的預(yù)測和監(jiān)測。
【檢驗(yàn)原理】
本品由基因重組表達(dá)的丙型肝炎病毒核心區(qū)抗原（HCV-cAg）免疫小鼠制備的單克隆抗體包被微孔板和酶標(biāo)記抗HCV-cAg單克隆抗體及陽性、陰性對照血清等組成，應(yīng)用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫法原理（ELISA）檢測人血清或血漿樣品中丙型肝炎病毒游離核心抗原。
【主要組成成分】
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（1） |
抗體包被板 |
96人份×1塊 |
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（2） |
酶結(jié)合物 |
20mL×1瓶 |
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（3） |
陽性對照血清 |
0.5 mL×1瓶 |
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（4） |
陰性對照血清 |
0.5 mL×1瓶 |
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（5） |
洗滌液（使用時(shí)20倍稀釋） |
50mL×1瓶 |
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（6） |
顯色劑 A |
6mL×2瓶 |
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（7） |
顯色劑 B |
6mL×2瓶 |
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（8） |
終止液 |
6mL×1瓶 |
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（9） |
樣品稀釋液 |
10mL×1瓶 |
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（10） |
不干膠片 |
3張 |
注意：不同批號的組分不得混用。
各組份主要組成：（1）抗體包被板：包被有針對核心抗原的單克隆抗體；（2）酶結(jié)合物：三羥甲基氨基甲烷緩沖液，山羊血清，牛血清白蛋白；（3）陽性對照血清：加入丙型肝炎病毒核心抗原檢測為陽性人血清；（4）陰性對照血清：加入丙型肝炎病毒核心抗原檢測為陰性的血清；（5） 洗滌液：NaCl，曲拉通 X-100；（6）顯色劑A：三水合乙酸鈉，過氧化尿素；（7）顯色劑B：檸檬酸，乙二胺四乙酸，四甲基聯(lián)苯胺；（8）終止液：硫酸；（9）樣品稀釋液： Tris 緩沖液，NaCl，酪蛋白鈉，牛血清白蛋白，吐溫-20，曲拉通X-100，山羊血清，硫柳汞。
其他所需物品和儀器
1、新鮮制備的蒸餾水或去離子水；
2、一次性手套；
3、精確的微量移液器和潔凈的吸頭；
4、干凈的吸水紙；
5、37℃恒溫箱或水浴箱；
6、計(jì)時(shí)器；
7、洗板機(jī)或洗瓶；
8、振蕩器；
9、酶標(biāo)儀。
【儲存條件及有效期】
2～8℃避光保存，有效期12個月。
生產(chǎn)日期及有效期至見標(biāo)簽。
【適用儀器】
自動酶標(biāo)測定儀，雙波長時(shí)設(shè)置主波長450nm，參考波長630nm。單波長時(shí)設(shè)置檢測波長為450nm，并需設(shè)置空白對照調(diào)零。
【樣本要求】
1、樣本可以使用血清或者血漿，檸檬酸鈉、肝素或EDTA等抗凝劑不會影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
2、樣本無需特殊制備處理，采用正確醫(yī)用技術(shù)采集全血樣本，靜置半小時(shí)以上后，3000轉(zhuǎn)/分鐘離心10分鐘以上，充分分離血清，使血清不含或極少含紅、白細(xì)胞，否則可能會導(dǎo)致假陽性結(jié)果。
3、不能使用加熱滅活處理后的樣本，脂血樣本應(yīng)當(dāng)在實(shí)驗(yàn)前采用超速離心法澄清樣本。
4、黃疸或嚴(yán)重污染的樣本將導(dǎo)致錯誤的結(jié)果。
5、樣本中含有疊氮鈉會影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，不能用疊氮鈉做樣本防腐劑。
6、血清樣本在未充分凝集前離心將導(dǎo)致纖維蛋白的存在，為避免纖維蛋白對結(jié)果的影響，必須確保離心處理前樣本已經(jīng)充分凝集。對于正在接受抗凝劑治療的病人樣本，需要延長凝集時(shí)間。
【檢驗(yàn)方法】
1、實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備
（1）從冷藏環(huán)境中取出試劑盒，在室溫下平衡30分鐘。
（2）洗滌液配制：試劑盒中的洗滌液為濃縮洗滌液，在合適的潔凈容器內(nèi)用新鮮制備的蒸餾水或去離子水將濃縮洗滌液稀釋20倍，混勻備用。
（濃縮洗滌液為高濃度磷酸鹽緩沖液，在溫度低時(shí)，可能會有結(jié)晶析出；請?jiān)谑褂们按_保濃縮洗滌液無結(jié)晶析出，如發(fā)現(xiàn)有結(jié)晶析出，請放置水浴鍋中加熱溶解，否則會影響洗滌效果。）
2、操作程序
1）每次實(shí)驗(yàn)需在包被板上設(shè)置一個空白孔，設(shè)置陰、陽性對照各雙孔。
2）加陽性對照血清：設(shè)兩孔為陽性對照，每孔加入陽性對照血清200μL。
3）加陰性對照血清：設(shè)兩孔為陰性對照，每孔加入陰性對照血清200μL。
4）加樣品稀釋液：每孔（不包括陰、陽性對照孔）中加入100μL樣品稀釋液�？瞻卓准尤�200μL樣品稀釋液。
5）加樣：樣品孔每孔加入樣品（血清或血漿）100μL。
6）溫育：用不干膠片封板后置37℃±1℃溫浴振蕩60分鐘。
7）洗滌：小心揭掉封板膜，吸去反應(yīng)板條孔內(nèi)液體，用洗滌液工作液注滿每孔，每孔應(yīng)加入不少于400μL的洗滌液工作液。靜置5～10秒，吸去孔內(nèi)洗滌液，如此重復(fù)5次。最后在干凈的吸水紙上拍干。
8）加酶結(jié)合物：每孔加200μL酶結(jié)合物。
9）溫育：用不干膠片封板后置37℃±1℃溫浴30分鐘。
10）洗滌：操作同7。
11）加顯色劑：每孔先加入100μL顯色劑A，再加入100μL顯色劑B，充分混勻，37℃±1℃溫浴避光顯色15分鐘。
12）終止反應(yīng)：每孔加50μL終止液，充分混勻。
13） 結(jié)果測定：結(jié)果需在反應(yīng)終止后10分鐘內(nèi)進(jìn)行測定。使用酶標(biāo)儀測量各孔吸光度值，可選擇單波長450nm（需設(shè)空白孔調(diào)零），或選擇雙波長主波長450nm，參考波長630nm，讀取各孔OD值。
【【陽性判斷值】
臨界值（CUT OFF）確定：陰性對照平均值+0.06（陰性對照OD值≤0.06時(shí)按0.06計(jì)算）。
陽性對照每孔OD值>0.8，陰性對照OD值每孔＜0.1時(shí)，測定結(jié)果有效。
結(jié)果判定：
（1）待測樣品OD值≥臨界值（CUT OFF）判定為HCV核心抗原陽性；
（2）待測樣品OD值＜臨界值（CUT OFF）判定為HCV核心抗原陰性。
對初檢陽性的樣品，應(yīng)進(jìn)行雙孔復(fù)檢以確認(rèn)真實(shí)結(jié)果。
【【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】
1、血清樣本未完全凝集、血漿樣本包含纖維蛋白或樣本被嚴(yán)重污染都會對結(jié)果造成影響。
2、實(shí)驗(yàn)中使用長時(shí)間貯存或反復(fù)凍融的樣本會對本試劑的檢測靈敏度造成影響，建議使用新鮮樣本進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
【檢驗(yàn)方法的局限性】
1、本試劑盒僅用于定性檢測人血清或血漿樣品中的HCV游離核心抗原。
2、由于ELISA反應(yīng)原理的限制，本試劑檢測結(jié)果陰性并不能完全排除HCV感染的可能，檢測結(jié)果陽性必須結(jié)合確證試劑或其他指標(biāo)和臨床信息進(jìn)行分析。
【【產(chǎn)品性能指標(biāo)】
1、用5份企業(yè)HCV核心抗原陽性參考血清檢測，結(jié)果不得出現(xiàn)假陰性；用4份國家HCV核心抗原陽性參考血清檢測，陽性參考品符合率（+/+）應(yīng)≥3/4。
用10份企業(yè)或國家HCV核心抗原陰性參考血清檢測，結(jié)果不得出現(xiàn)假陽性。用4份企業(yè)最低檢出限參考品檢測，S1、S2 和S3應(yīng)為陽性；S4為陰性；用5份國家最低檢出限參考品檢測，L1、L2 和L3應(yīng)為陽性，L4﹑L5可陽性或陰性。
用企業(yè)或國家精密性參考品重復(fù)10次檢測，所有孔實(shí)驗(yàn)結(jié)果均為陽性，CV（%）≤15%（n=10）。
穩(wěn)定性試驗(yàn)各組分置37℃6天后，上述四項(xiàng)指標(biāo)均應(yīng)符合規(guī)定。
2、本試劑檢測丙型肝炎病毒核心抗原的靈敏度為1pg/mL。
3、交叉反應(yīng)實(shí)驗(yàn)表明，HBV，HIV和HAV陽性樣本不影響本試劑盒對HCV核心抗原的檢測。對25例RF高濃度陽性樣本及23份ANA高濃度陽性樣本分別采用本試劑進(jìn)行HCV核心抗原檢測，兩類樣本假陽性數(shù)均為1例，特異性分別為96.0%和95.7%。
4、臨床研究60份同源血（同一患者的血清和血漿）檢測結(jié)果完全一致。
【【注意事項(xiàng)】
1、從2～8℃條件下取出的樣本應(yīng)置于室溫平衡30分鐘再進(jìn)行檢測。
2、須確保加樣量的準(zhǔn)確，如果加樣不準(zhǔn)確，可能會導(dǎo)致錯誤的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
3、使用微量移液器手工加樣時(shí)，每次應(yīng)該更換吸頭吸取樣本。
4、在操作過程中應(yīng)盡量避免微孔中產(chǎn)生氣泡。
5、濃縮洗滌液系高濃度磷酸鹽，可能會形成結(jié)晶，如未完全溶解，會影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，同時(shí)可能會堵住自動加樣器或洗板機(jī)管道。若出現(xiàn)結(jié)晶，請放置37℃充分溶解，然后稀釋均勻使用。
6、封板膠紙不能重復(fù)使用。
7、用水浴鍋反應(yīng)時(shí)，請將反應(yīng)板浸放于水中1/3，底部以網(wǎng)格支撐物支撐，水溫控制在37℃。
8、洗板：（1）以洗板機(jī)洗板時(shí)，洗板機(jī)的加液量至關(guān)重要，即避免洗液過量溢出，又能充滿反應(yīng)微孔中，洗板次數(shù)不應(yīng)少于5次，并經(jīng)常注意檢查加液頭是否堵塞。
（2）手工洗板時(shí)，請勿使用帶紙屑的吸水材料拍板，以防外源性過氧化物酶類似物或氧化還原物質(zhì)與顯色劑發(fā)生反應(yīng)，影響檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。
（3）洗板時(shí)所用的吸水紙請勿反復(fù)使用。
（4）洗板機(jī)最好在每次使用前、后，用蒸餾水或去離子水沖洗干凈，以防止管路堵塞或腐蝕。
9、如果有任何試劑接觸皮膚和眼睛，必須用大量清水對該部位進(jìn)行擴(kuò)大清洗和消毒；終止液為硫酸，具有腐蝕性。
10、試劑盒內(nèi)有關(guān)組份及臨床樣本均應(yīng)視為有潛在傳染性，請按相關(guān)的實(shí)驗(yàn)室工作規(guī)范來執(zhí)行和處理。
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